非诺贝特胶囊仿制药与原研药溶出度 一致性评价

正文

非诺贝特（Ｆｅｎｏｆｉｂｒａｔｅ）为第二代苯氧芳酸类药物，于１９７４年由法国ＬａｂｏｒａｔｏｉｒｅｓＦｏｕｒｎｉｅｒＳＡＳ（利博福尼）开发，最早在法国上市。

本品为降低甘油三酯的首选药物之一，同时还可降低血尿酸水平，对２型糖尿病和代谢综合征的治疗也有较好作用［１］。

非诺贝特为水难溶性药物，属于生物药剂学分类ＢＣＳ分类Ⅱ类药物，其口服固体制剂的溶出度检查项不仅是控制药物体外质量的重要指标，也是评价药物在体内释放的有效手段［２］。

非诺贝特胶囊已收载于ＵＳＰ３９［３］、《中国药典》２０１５ 年版［４］和进口注册标准［５］中，其溶出度方法在溶出介质的选择、转速的设定、取样时间、限度、溶出液测定方法（ＵＶ、ＨＰＬＣ法）均存在较大差异。

本文采用体内外相关性预测软件ＧａｓｔｒｏＰｌｕｓ对现行标准溶出度条件进行了初步分析，建立了体内外相关性较好的溶出度曲线检查方法，对原研制剂及仿制药进行溶出曲线考察，并采用ｆ２因子进行相似性评价，为国内非诺贝特仿制药一致性评价研究工作和处方工艺开发提供参考。

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仪器和试药

1.1 仪器

ＳＮＴＲ－８４００ＡＴ全自动溶出仪（日本 Ｓｈｉｍａｄｚｕ公司）；ＳａｒｔｏｒｉｕｓＣＰＡ２２４５型电子分析 天平（北京赛多利斯仪器有限公司）；岛津ＬＣ－２０ＡＤ型高效液相色谱仪（日本岛津公司）。

1.2 试药

非诺贝特对照品（含量９９．９％，中国食 品药品检定研究院提供，批号：１００７３３－２０１５０２），非诺贝特胶囊（原研胶囊，规格：２００ｍｇ，法国利博福 尼制药公司，批号：２５０３９）；仿制药由国内６家企业（Ａ～Ｆ）。

十二烷基硫酸钠（ＳＤＳ）厂家１（电泳级）（含量≥９９．０％，批号：２０１７０５２４）、厂家２（含量≥ ９５％，批号：１００８０９－２０１３０２）、厂家３（含量≥８６％， 批号：１５０３２２）和厂家４（含量≥９９％，批号：Ｌ６０２６）。

磷酸氢二钠、磷酸二氢钾、醋酸钠及盐酸均为分析纯；ＳＤＳ（含量≥９９．０％，国药集团化学试剂有限公司，批号：２０１７０３２２）；溶出介质：娃哈哈纯净水，采用脱气装置经４２℃脱气１ｈ后立即使用。

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方法与结果

2.1 溶出度测定方法的选择

ＫｒｏｍａｓｉｌＣ１８（１５０ｍｍ×４．６ｍｍ，５μｍ）色谱柱；流动相为水（用磷酸调节ｐＨ 值２．５）－ 乙腈（３０∶７０）；检测波长：２８６ｎｍ，柱温：４０ ℃，流 速：１．０ｍｌ·ｍｉｎ－１，进样量：１０μｌ。

2.2 溶液的制备

2.2.1 对照品溶液

精密称取非诺贝特对照品２００ｍｇ，置２００ｍｌ量瓶中，加乙醇溶解并稀释至刻度，作为对照品贮备液，精密量取５ｍｌ置２５ｍｌ量 瓶中，分别用相应溶出介质稀释至刻度，摇匀，即得。

2.2.2 供试品溶液

取非诺贝特样品每批各６粒，分别在０．０２５ｍｏｌ·Ｌ－１１ＳＤＳ的ｐＨ１．０、４．０、６．８缓冲 液和０．０２５ｍｏｌ·Ｌ－１ＳＤＳ水溶液４种溶出介质条件下进行试验，取溶出液用０．４５μｍ滤膜滤过，取续滤液即得。

2.3 溶出条件的选择

本文采用ＳｉｍｕｌａｔｉｏｎｓＰｌｕｓ公司ＧａｓｔｒｏＰｌｕｓ软件（９．０）建立了基于原研药的体内外相关性模型，分别采用国内外药典收载的溶出条件测定原研胶囊，并进行体内外相关性分析，选择了体内外相关性较好的溶出度方法进行溶出曲线考察（图 １）。

最终确定的溶出度试验条件为：桨法；转速为７５ ｒ·ｍｉｎＬ－１；溶出体积９００ｍｌ；溶出介质为２．２．２项下４种溶液；取样时间：１０、１５、３０、４５、６０、９０ｍｉｎ。

2.4 溶出方法学试验

国内外标准溶出液测定方法有ＨＰＬＣ和ＵＶ法，考虑到ＵＶ法专属性相对较差，不同企业辅料可能会对测定产生一定影响，故本文选择专属性更好的ＨＰＬＣ法进行了方法学考察。

2.4.1 线性关系

精密量取２．２．１项下对照品贮备液适量，分别用相应溶出介质溶解并稀释制成浓度分别为１０．１４、１６．９１、５０．７３、１２６．８２、２０２．９０、２５３．６３μｇ·ｍｌ－１的系列浓度溶液，按２．１项下色谱条件进行测定，非诺贝特在各溶出介质中回归方程见表１线性范围在１０．１４～２５３．６３μｇ·ｍｌ－１。

2.4.2 回收率试验

选取Ａ企业样品，按企业提供的处方同比例配制空白辅料样品，平行精密称取９份（每份０．１５ｇ），置１０００ｍｌ量瓶中，分别精密加入非诺贝特对照品１２０、１６０、２００ｍｇ各３份，加入相应溶出介质溶解，滤过，取续滤液，按照２．１项下色谱条件测定，结果非诺贝特在０．０２５ｍｏｌ·Ｌ－１ＳＤＳ的ｐＨ１．０、ｐＨ４．０、ｐＨ６．８和水溶液中回收率分别为１０１．１２％、 ９８．６７％、９９．８１％、１０１．９５％，ＲＳＤ 分别为１．０６％、０．６３％、０．９５％和０．８４％（ｎ＝９），方法回收率良好。

2.4.3 辅料干扰试验

取Ａ 企业空白辅料约０．１５ｇ，分别加４种溶出介质１０００ｍｌ，超声振荡，滤过，取续滤液，按照２．１项下色谱条件测定，结果空白辅料不干扰测定。

2.4.4 滤膜吸附性

取２．２．２项下９０ｍｉｎ取样点溶出液经离心后和经滤膜（水系，０．４５μｍ）分别滤过２、４、８ｍｌ后分别进行测定，结果离心后非诺贝特峰面积与滤过后峰面积的ＲＳＤ为０．９６％，结果表明滤 膜对非诺贝特基本无吸附。

2.4.5 管路吸附性

在溶出曲线最后１个取样点分别进行手动取样和仪器自动取样并进行测定，结果２种溶出液测得的非诺贝特峰面积相对平均偏差为０．８５％，表明溶出仪管路对非诺贝特基本无吸附。

2.4.6 不同厂家ＳＤＳ对溶出曲线测定的影响

取４家国内外生产的ＳＤＳ进行试验，配制０．０２５ｍｏｌ·Ｌ－１ＳＤＳ的水溶液，对同一批样品进行溶出曲线测定，结果不同厂家ＳＤＳ对本品的溶出基本无影响，但试验发现使用含量较低的厂家３溶出相对较快（图２）。

2.4.7 溶出曲线测定

取６家生产企业样品和原研胶囊，测定其在４种溶出介质中的溶出曲线，采用ｆ２相似因子评价仿制药与原研胶囊体外溶出曲线相似性，以考察各国内各企业产品与原研制剂溶出行为差异，见表２，图３。

由表２可知，Ｂ、Ｃ、Ｅ企业产品４条溶出曲线与原研品相似。

Ａ企业产品在除０．０２５ｍｏｌ·Ｌ－１ＳＤＳ的ｐＨ６．８溶液外其他３种溶出介质中与原研品相似，Ｆ企业产品在０．０２５ｍｏｌ·Ｌ－１ＳＤＳ的ｐＨ１．０溶液中与原研品相似，其他３种溶出介质中均不相似，Ｄ企业产品与原研品在４种溶出介质中均不相似。

2.4.8 稳定性试验

取２．４．７项下４种介质中９０ ｍｉｎ时的供试品溶液适量，分别于室温下放置０、２、４、８、１６ｈ后，按照２．１项下色谱条件测定，结果显示非诺贝特峰面积基本无变化，４种溶出介质中非诺贝特峰面积的ＲＳＤ％分别为０．３３％、０．２５％、０．６３％和０．４８％，供试品溶出液在４种介质中室温１６ｈ内稳定性良好。

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讨论

不同厂家ＳＤＳ对本品的溶出基本无影响，但试验中发现含量较低的厂家３溶出相对较快，经过对ＳＤＳ进一步试验，发现ＳＤＳ纯度不高，产品中除去十二烷基外还混有其他长链烷基，提高了非诺贝特溶解度，从而导致非诺贝特溶出最好。

溶出曲线研究结果表明，国内６家企业中有３家企业产品与原研品溶出曲线相似，整体产品质量尚可，但部分企业产品溶出较原研药慢。

原研胶囊为提高非诺贝特溶解度，通过气流粉粹机将非诺贝特与少量表面活性剂混合在一起粉碎，得到平均粒径为６～７μｍ的混合物，体内外试验均表明减小粒径能有效提高溶出度，表面活性剂的加入使溶出度进一步提高，而部分国内企业产品仍采用常规生产工艺，导致国内部分仿制药产品内在品质与原研胶囊之间尚存在一定差距，建议国内生产企业在药品质量一致性评价研究过程中应对原研产品进行全面剖析，从而达到与原研产品质量和疗效一致性的目的。

仿制药一致性评价的很大一部分研究内容是溶出曲线的选择和比较，一般来说是参考美国药典橙皮书或日本橙皮书收载的方法，但对部分品种来说体外溶出与体内的相关性并不是特别好，因此会出现体外溶出曲线一致，但生物等效性试验失败的情况。

本研究采用了具有一定指导意义的Ｇａｓｔｒｏ Ｐｌｕｓ软件建立体内外相关模型来选择溶出曲线，提高生物等效性试验成功率，为仿制药一致性评价提供一种新的研究思路和方法。近年来，血脂异常及其并发症的发病率迅速增高，非诺贝特调脂疗效确切，市场销售额逐年增加，为抢占不断增长的降血脂药市场，国外各大药品生产企已采用微粉化技术［７］、纳米结晶技术［８－１０］、固体分散体技术［１１］、自乳化技术［１１，１２］等技术研发出具有更高生物利用度的非诺贝特制剂产品，与国外制药企业相比，我国制药企业诺贝特制剂产品开发滞后，市场占有率低，只有开展新的研究和尝试，研制出更加高效的产品及其复方制剂，才能改变目前国内非诺贝特的市场格局。

参考文献

详见 解放军药学学报 2018年12月20日第34卷第６期