双歧杆菌Bb-12功效性介绍
Inge Tarnow DVM博士，科学顾问，HHN-科学事务部
1.被证实的功效
BB-12®是世界上文件记录最多的双歧杆菌。它在超过300种科学出版物中得到了描述，其中有超过130种属于临床研究的出版物。追溯到1987年，BB-12®已经在临床试验中进行了25年以上的检测（Black 1987）。BB-12®在临床试验中已经进行了检测，研究对象包括从早产儿到老人，而且服用剂量最高达到1000亿CFU/天。
益生菌的先决条件之一是具有临床实验验证的健康功效。BB-12®对胃肠道健康和免疫功能的健康作用已经在多项临床研究中得到了验证。
2.在胃肠道中的存活情况
益生菌的某些健康功能需要益生菌在特定靶标部位的存活能力和生理活动为前提。由于益生菌的靶标部位可能并不明确，而且由于难以测定在该部位的存活能力，往往采用粪便收集来确认益生菌在胃肠道中的存活能力。
一项安慰剂对照的交叉研究评估了受试者服用含有BB-12®和菊粉的合生元酸奶后，粪便样品中检测到BB-12®的情况。收集46名志愿者的粪便样品，并采用实时聚合酶链反应（PCR）来监测菌群的恢复以及变化情况。粪便样品中检测到BB-12®，而且可以在摄入长达两周后在粪便中检测到。死/活PCR程序说明粪便样本中检测到的BB-12®中有超过90%都是活的（Palaria等，2012）。
在一项随机、安慰剂对照、双盲平行剂量依赖研究中，71名健康的年轻成人被分为五组。研究对象在三周内接受安慰剂或从108-1011 CFU/天的四种剂量的两种益生菌。随着剂量的增加，粪便中BB-12®的检测情况得到了显著改善。在高剂量组，15名志愿者中有13名的粪便样品中检测到BB-12®（Larsen等，2006）。
在一项包含14名志愿者的研究中，受试者食用发酵奶后，对其中含有的BB-12®、F19®和嗜酸乳杆菌NCFB1748在肠道存活和存续情况进行了监测。研究采用对杆菌选择性培养基分离物的随机放大多态DNA（RAPD）指纹分析的方法，来检测粪便中的复原情况。研究对象食用后，BB-12®和F19®在胃肠道中存活情况良好，分别在79%和100%的受试者粪便样品中检测到。（Matto等， 2006）。
另一项研究包括30名健康成人，他们被分为三个干预组：低聚半乳糖（GOS）组，或GOS加BB-12®组、或仅摄入BB-12®组。干预前后都采集了粪便样本。采用RAPD指纹法从粪便中回收了BB-12®。分析发现BB-12®组和GOS + BB-12®组中都分离到大量与BB-12®相同RAPD指纹的菌体，这说明BB-12®通过胃肠道后存活情况良好。BB-12®组和GOS + BB-12®组的志愿者中40%在干预一周后，20%在干预两周后发现粪便样品中检测到BB-12®（Alander 2001）。
综上所述，这些数据表明BB-12®不仅在通过胃肠道后存活情况非常良好，而且它还能迅速在结肠中定值。上述数据还说明了BB-12®的复原情况与剂量有关。
3.对肠道菌群的调节作用
人体的大肠是各类细菌的寄居地，其中双歧杆菌是这一复杂生态系统的知名成员。人们一般认为双歧杆菌和乳酸杆菌对于胃肠健康作用重大。在老年阶段，双歧杆菌和乳酸杆菌的数量开始衰减，与此同时包括梭菌和肠杆菌科细菌在内的其他细菌团的增殖，人们认为这会对胃肠健康造成不利影响。益生菌能够控制有害细菌的增殖，增加菌群中双歧杆菌和乳酸杆菌的含量，这被认为是有益健康的。
多项临床研究已经证明BB-12®本身或者与其他益生菌或成分结合会增加胃肠道有益细菌，并减少潜在的病原菌。
一项双盲、随机、安慰剂对照的剂量依赖研究，以58名健康成人为样本，使其在四周时间内服用发酵奶，调查发酵奶中的BB-12®，8x109或38x109 CFU/天、乳酸杆菌LA-5®，1x109 CFU/天以及绿茶萃取物对粪便中细菌数的影响（Savard等，2011）。定量PCR的分析结果表明与基线情况相比，激活组中双歧杆菌数量显著升高。而与安慰剂组相比，粪便样品中活的乳酸杆菌的数量明显较高，，肠道球菌的数量则在干预后大幅降低。
在一项非盲的单组研究中，以15名健康成人为样本，使其在两周时间内摄入发酵乳，研究发酵乳中的BB-12®（共计1x1011 CFU/天）、类干酪乳杆菌类干酪亚种F19®以及嗜酸乳杆菌NCFB 1748对肠道菌群的影响（Matto等，2006）。益生菌株往往会在粪便中双歧杆菌和乳酸杆菌的基线水平上总数迅速增加。未发现梭菌、肠杆菌或肠球菌出现任何变化。
一项三臂、单盲研究随机分配30名健康成人在两周时间内分别服用3x1010CFU/天的BB-12®、BB-12®加上4克GOS、或仅服用4克GOS（Alander 2001）。结果测定采用培养法检测的粪便菌群的选定成分。在干预过程中，双歧杆菌的平均数在各研究组别中略有增加。BB-12®加GOS组的增量高于BB-12®组。增量从统计学角度来看是显著的。乳酸菌、产气荚膜梭菌或大肠菌在研究过程中未发现变化。
综上所述，这些研究表明食用BB-12®有利于增加双歧杆菌的总数，并可能抑制胃肠菌群中的一些有害细菌。这有利于肠道中的健康菌群。
4.胃肠功能
4.1 肠道功能
规律的排便、粪便自然的通过时间以及正常的粪便硬度都反映了肠道的健康状况。但正常肠道功能的界限是宽泛的，而且在很大程度上因人而异。排便的正常范围是五到14次每周。频率过高或过低则分别被认为是腹泻或便秘。食物通过胃肠道的时间一般是在半天到三天之内。胃消化迟缓或便秘是极其常见胃肠道问题，尤其是在老年人中。益生菌可能通过促进胃肠道蠕动，或增加通过时间，或者软化粪便而对肠道功能提供有益的帮助。
一项双盲、随机的安慰剂对照研究，有209名老年疗养院成员参加，分别服用含有1x109 CFU/天BB-12®，或两种长双歧杆菌菌株，或安慰剂的发酵燕麦饮料，检测对排便的影响（Pitkala等，2007）。
受试者根据在疗养院的停留时间长度分别接受1到7个月的干预。服用BB-12®的小组正常排便的天数占排便的总天数的比例较高：BB-12®为26.9%，而安慰剂为20%。BB-12®组中的研究对象在超过30%的日子里正常排便的人数增加了53%（图3）。
图3：Pitkala等2007开展的一项随机、双盲、安慰剂对照研究表明BB-12®能使肠道功能改善35%。在BB-12®组中30%以上的天数中正常排便的研究对象人数增加了53%。
健康成人的研究已经证明BB-12®能提高排便频率并软化粪便硬度。在一项双盲、随机、安慰剂对照的交叉设计中，健康女性服用两周发酵乳中，BB-12®的剂量为1x109 CFU/天（Uchida等，2005）。在这项研究中，41名女性在服用BB-12®期间的平均排便频率为两周内8.8次，而对比之下，安慰剂阶段为8.0次。当将研究对象分为便秘（每两周少于8次）和非便秘倾向组时，便秘倾向组服用BB-12®时期的排便频率明显高于服用安慰剂阶段。
在一项类似的研究中，35名健康女性服用两周发酵乳，其BB-12®的剂量为 4x109 CFU/天（Nishida等，2004）。
研究发现与服用安慰剂相比所有研究对象服用BB-12®和阶段之间排便频率出现了不显著的增加，而统计数据的显著增加出现在排便频率为每周四次或以下的便秘研究对象服用BB-12®阶段和服用安慰剂阶段之间。
在一项单组安慰剂对照研究中，发酵乳中的BB-12®以5.2x109CFU/天的剂量分配给30名健康成人服用两周，随后在中间的清洗阶段后，服用安慰剂两周（Matsumoto等，2001）。安慰剂阶段后一个月，将发酵乳中的BB-12®以更高的剂量（15x109 CFU/天）服用两周。入选标准是排便频率低于每周四次。主要结果测定是排便频率。BB-12®低剂量阶段的排便频率高于安慰剂阶段。同样，BB-12®高剂量阶段的排便频率高于安慰剂阶段。
综上所述，上述研究证明BB-12®改善了肠道功能，尤其是对于患有轻度便秘的群体来说。
4.2 婴幼儿腹泻
腹泻是婴儿患病和死亡的重要原因，而开发预防措施仍然是一个重要的目标。双歧杆菌以及其他产乳酸细菌经验证具有抵御急性和持续腹泻的保护作用。
一项多中心、双盲、安慰剂对照研究针对辅以BB-12®的牛奶配方在预防急性腹泻中的功效，在90名8个月以下留宿幼儿园或抚育中心的健康婴儿中开展了评估。腹泻的发病率出现了减缓的趋势，28.3%服用BB-12®的婴儿出现急性腹泻，而对比之下，安慰剂组的数字为38.6%。BB-12®组的腹泻天数从统计学角度来看较少，腹泻的日概率较低。这些结果说明BB-12®可能具有防腹泻的保护作用（Chouraqui等，2004）。
在一项双盲、安慰剂对照研究中，慢性病医院的就诊幼儿被随机分配服用标准儿童配方，或含有BB-12®和嗜热链球菌TH-4®的相同配方（Saavedra等，1994）。每天对儿童的腹泻发生情况进行评估，并通过酶免疫测定来分析粪便样本的轮状病毒抗原。同时在腹泻发作期获取粪便样本用于病毒学和细菌性分析。在17个月中，对55名幼儿的共计4447个人日进行了评估。26名服用对照配方的儿童中有8名（31%）在研究过程中出现了腹泻，而服用补充配方的29名儿童中出现腹泻的有两名（7%）。服用对照配方的研究对象中有10名（39%）在研究过程中在某些时间出现轮状病毒脱落，而服用补充配方的则有3名（10%）。这些结果说明用BB-12®和嗜热链球菌TH-4®进行补充的幼儿配方减少了医院就诊儿童中的急性腹泻发病率和轮状病毒脱落。
综上所述，这些研究证明BB-12®可能对婴幼儿腹泻的发病率和持续时长都有积极作用。
4.3 抗生素相关性腹泻
抗生素治疗可能造成严重的副作用。一般抗生素对胃肠道菌群造成的干扰会导致呕吐和腹泻。经验证，益生菌能够减少副作用，并提高抗生素治疗的完成率。而且，益生菌可能加快抗生素治疗后的复原。
在343名病人的七天抗生素治疗过程中，一项随机、双盲、安慰剂对照研究对BB-12®和LA-5®在预防抗生素相关性腹泻（AAD）方面的功效进行了评估。用AAD评价的症状日记卡对十四天的干预进行评估。14天的治疗之后，益生菌组中AAD的发病率显著下降到10.8%，对比之下，安慰剂组为15.56%。益生菌组的腹泻持续时间也大幅缩短（2.32天），而对比安慰剂组为4.58天。安慰剂组严重腹泻的发病率明显高于益生菌组（31.6%）。上述结果表明， BB-12®和LA-5®能有效降低AAD的持续时间和严重程度（Bhalla 2011）。
为了研究益生菌作用的矩阵特异性，尤其是AAD的改善作用，开展了一项对照随机双盲研究。八十八名只是感染了幽门螺杆菌的研究对象被分配服用含有BB-12®和LA-5®的发酵乳、含有BB-12®和LA-5®的巴氏消毒发酵乳，或酸化乳（对照），为期八周。在第五周，进行幽门螺杆菌根治疗程。通过尿素呼气试验测定幽门螺杆菌活性，用经过证实的调查问卷记录AAD以及其他胃肠道问题。分配食用含有活的BB-12®和LA-5®的发酵乳的研究对象大幅缩短了AAD的持续时间（四天），而相比之下，服用含有BB-12®和LA-5®的巴氏消毒发酵乳的研究对象为十天，对照组为十天。而且，益生菌明显改善了胃肠道症状（de Vrese等，2011）。
160名感染幽门螺旋杆菌的病人被随机分为三联加益生菌组或单纯三联组，接受为期一周的三联疗程，分别服用或不服用为期五周的含有BB-12®和LA-5®的发酵乳作为补充。对粪便样本中的厌氧性生物双歧杆菌进行检测。益生菌组完成7天治疗的比例显然高c于对照组（68%对比44%）。在益生菌组中，呕吐、便秘、腹泻或金属味觉等常见副作用明显减少。益生菌组中幽门螺旋杆菌的根除率明显较高。三倍疗程后，两组都观察到了粪便中的双歧杆菌被耗尽。然而，相对于对照组。益生菌在四周后恢复了双歧杆菌的水平。这说明BB-12®和LA-5®能减少抗生素治疗的副作用，有助于治疗依从性，提高幽门螺旋杆菌的根除率，并恢复肠道群（Sheu等，2002）。
BB-12®和LA-5®抵御幽门螺杆菌的反协同效应也在其他研究中得到了证实（Sheu等，2006，Wang等，2004）。
总之，上述研究证明，BB-12®与LA-5®结合能显著减少抗生素相关性腹泻的发病率和持续时间。此外，BB-12®和LA-5®可能抑制幽门螺杆菌，并有利于恢复幽门螺杆菌阳性研究对象体内的菌群。
5.免疫功能
5.1 呼吸道感染
研究健康人类的免疫系统是一项特殊的挑战。免疫系统具备多种成分的高度缓冲能力，因此很难解释或预测特定时间的确切反应（Albers等，2005）。因此传染模型被认为提供了探索健康人类免疫系统的功能和响应的最佳方法（Albers等，2005，Burleson和Burleson，2007）。
推荐的一种方法是使用含有被杀死或削弱的病原体的疫苗，从而可以获得特定的免疫响应。针对这一挑战的响应可以作为综合免疫响应的一项指标。
益生菌可能以多种方式与免疫系统相互作用，例如通过增加局部和全身抗体的产生，增加免疫细胞的活性，调节上皮细胞和免疫细胞的信号，以及诱发树突细胞的表型变化。
一项随机、安慰剂对照、双盲的人体研究采用疫苗模型研究了BB-12®对健康人体免疫系统功能能力的影响。
在这项研究中，在六周内54名研究对象分别服用了BB-12®和52安慰剂。两周后，研究对象们接受了流感接种。在基线时以及六周后采集血浆和唾液样品，用于分析流感特定抗体和所有抗体、细胞因子IL-2、IL-10和INF-γ以及先天免疫参数。
与安慰剂相比，BB-12®增加了流感特异抗体应答（图4），而且研究对象抗体水平至少增加2倍的人数明显多于益生菌组。细胞因子或先天免疫参数未发现任何差别。各组的不良事件发生率和模式相似，而且干预后破伤风特异性IgG没有变化，这说明补充BB-12®只引起了特殊的免疫应答（Rizzardini等，2012）。
图4：Rizzardini等2012年进行一项随机、双盲、安慰剂对照研究表明BB-12®能改善免疫功能。
有研究调查了在上呼吸道感染过程中，BB-12®和LGG®对与健康相关的生活质量的影响。研究评估益生菌对于普通感冒持续时间、严重程度的方式以及症状对日常生活的影响。198名大学生被随机分配服用安慰剂或BB-12®和LGG®为期十二周。每天，学生们都要完成一项调查，评价补充益生菌的作用。对比安慰剂组，益生菌组上呼吸道感染的平均持续时间明显缩短了两天，而平均严重程度得分显著降低了34%。两组之间的误工天数没有差异。但益生菌组与安慰剂组相比，错过的上学天数少了0.2天。研究表明BB-12®和LGG®缩短了大学生们的感冒持续时间，并尽可能降低严重程度，并减少了误课天数（Smith等，2012）。
一项随机、安慰剂对照的双盲研究调查了BB-12®对婴儿急性感染风险的作用。109名两个月以下的婴儿服用了BB-12®或安慰剂，直至他们八个月大为止。登记急性感染的征兆和症状。在这项研究中，与安慰剂相比，BB-12®组对胃肠道感染或中耳炎没有影响，但报告的呼吸道感染较少（图5）（Taipale等，2011）。
图5：在Taipale等2011年开展的一项研究中，BB-12®降低了呼吸道感染的风险。在这项随机、双盲、安慰剂对照研究中，BB-12®采用镇静剂中的缓释药片服用。