许多时候，都需要无菌环境，无菌培养。例如细胞在体外培养时，为了保证无菌，有时需要加入抗生素。但长期加抗生素对细胞也不利。一些特殊实验也需要不含抗生素。有没有一种方法，可提早知道细胞是否有细菌污染呢？

有些客户采用了德国Minerva Biolabs生产的细菌检测试剂盒（英文名：Onar® Bacteria Detection Kit，货号），它是PCR方法，可快速检测生物样品（包括细胞培养物和病毒贮存液）中是否存在细菌。该试剂盒引物针对细菌16s rRNA的高保守区,，可检测超过45种细菌属。

该试剂盒中的主要试剂均为冻干粉，性能稳定。它包含有：

冻干预混液：含引物/核苷酸/内控对照DNA /聚合酶

反应缓冲液

冻干的阳性对照DNA

PCR级水

样本可以是细胞上清，样本不用提DNA，但需要热灭活（95 °C 5分钟）。

样本需不含抗生素。如含抗生素，则细胞应在不含抗生素的培养基中再培养至少一代。

细菌阳性扩增片段450 bp左右，内控对照扩增片段约140bp。

该试剂盒的检测限为2.4×10的3次方细菌 /ml。

为避免假阳性，建议使用带滤芯吸头。

扩增后跑胶观察条带，即可判断结果。示意图如下：

图. 内控对照显示PCR反应正常，样本中无PCR抑制成分。460bp左右存在目的条带，提示存在细菌污染。

该产品有2篇引用文献，如下：

1. Linow M., (2012). Mastermix 16S – Ultra Sensitive Detection of Microbial DNA. Research in Molecular Diagnostics, No. 2/12.

2. Simonsen Ø. et al., (2015). Characterization of the exte nt of a large outbreak of Legionnaires‘ disease by serological assays. BMC Infectious Diseases, 15:163. doi: 10.1186/s12879-015-0903-2.

感谢缔一生物提供相关内容。