胎牛血清作为天然培养基被实验室和科研单位广泛使用,它富含细胞生长中的各种营养成分,但是也容易受到来自母牛自身存在的病毒感染例如疯牛病的影响,从而给细胞培养带来潜在的干扰。
在美国,胎牛血清的病毒检查遵循着9 CFR 113.52 、9 CFR 113.53联邦法令,并以兽药委员会(CVMP)关于免疫性兽药生产中应用牛血清的指南文件(EMEA/CVMP/743/00-Rev.2)、专利药委员会(CPMP)关于生物药生产中牛血清应用指南的文件(EMEA/CPMP/BWP/1793/02)为参考,并在美国药典(USP)中有所描述。而我国在药典中目前只有有关新生牛血清的质检规定,还没有胎牛血清的内容。
在USP提到病毒检查中,建议使用两种或两种以上的细胞系作为检测细胞,其中一种细胞系应为牛源。检测时,添加15%的待测牛血清培养细胞至少21天,期间细胞至少传代两次。之后观察是否存在病毒的扩增。如用显微镜观察是否存在细胞病变效应(例如由牛鼻支气管炎病毒导致)、细胞染色和镜下包涵体检查、血吸附检查((牛副流感3型病毒),并在此基础上进行针对如下病毒的特异性的免疫荧光抗体检查:
Ø牛病毒性腹泻病毒(BVDV)
Ø牛细小病毒
Ø牛腺病毒
Ø牛兰舌病毒
Ø牛呼吸道合胞病毒
Ø呼肠弧病毒
Ø狂犬病病毒
在其他牛血清的应用中,可能还需要检测一些其他的病毒。如:
牛赤羽病,牛疱疹病毒1(BHV-1)、副流感-3病毒(PI-3)、牛白血病、牛轮状病毒、牛圆环病毒、牛多瘤病毒、冠状病毒、牛环曲病毒、牛肠道病毒、牛星状病毒、口蹄疫病毒(FMDV)、牛瘟病毒。
总之,确定牛血清没有病毒感染,无论对于细胞培养,还是疫苗生产,都具有非常重要的意义。