转录组项目有很多老师反馈自己的RNA-Seq样本提取完整性差、提取量不足，下机数据质量差，分析结果不理想等问题，影响自己的课题进度。目前有针对分析条件的优化，但“ RNA-Seq千里之行，始于样本 ”，保证 RNA 提取的完整性与总量，是 RNA-Seq 的第一步，也是很重要的一步！从源头分析，您的样本准备做好了吗？

由于RNA样本的特殊性：

1）结构的特殊性，（相比于DNA）极易降解；

2）RNA酶非常稳定且几乎无处不在，常规的高压灭菌等物理方法很难有效灭活RNA酶；

3）RNA在细胞体内有严谨有序的调控模式，这些信号通路会因为外部环境的改变而改变。

基于 这 三点， 您的 RNA 样本可能在提取、运送，甚至在取样过程中就已经降解了， 为保证 RNA 的质量及所获得的数据能够真实反应母体内该组织或器官的 RNA 表达， 小编这这里给您做几点分享，希望对您的研究有所帮助。

植物样本

植物样本提取过程中常见的干扰：

多酚： 植物样本在提取中，经过匀浆，植物体内的酚类物质被释放，被氧化，氧化后的酚类物质会和 RNA 稳定结合，影响 RNA 纯度，而且随着植物生长，植物中的酚类物种会增多。

多糖： 多糖的理化性质和 RNA 相似，去除多糖的同时会带走一部分 RNA ，另外在沉淀 RNA 时，多糖会形成凝胶状沉淀，会影响 RNA 总量和纯度。另外，还有一些酶类物质的影响。

我们建议

1） 采样时选取幼嫩组织；

2） 在采集样本之前，将样本置于黑暗环境 24-48h 后再取材；

3） 如果需要立即取材，请尽快采集好样本后，迅速置于低温保存，干冰运输，减少因酚等化合物的氧化对核酸的影响。

动物样本

动物样本提取RNA干扰： 针对于动物样本，不同的组织间差异较大，主要是一些内源酶的影响，如蛋白酶、淀粉酶、脂肪酶和纤维素酶等，针对不同组织样本的内源酶可以相应的做处理。动物组织离体后 RNA 迅速降解，所以针对动物组织来讲，取样过程一定要迅速！

我们建议

1） 从活体中获取目的组织后，快速用 RNase-free 水清洗，以去除血渍和污物，吸干表面液体；

2） 可以将样品分割成黄豆大小的小块（提取时冰冻状态下难以切开，提高提取效率），液氮速冻，干冰运送。

细胞样本

因为细胞样本比较脆弱，针对于细胞样本，一般采取的方案是先把细胞裂解，再寄送。

针对不同类型的细胞样本

我们建议

贴壁细胞：倒掉培养基，按一定的细胞比例加入TRIzol试剂；

悬浮细胞：可以先离心，按照约100ul细胞离心液滴加1ml的TRIzol的比例加入TRIzol试剂。使用移液器反复吹打细胞，使之充分溶解于TRIzol中形成清亮不粘稠的液体。

血液样本

用于提取 Total RNA 的血液，强烈建议分离白细胞或使用血液保护剂送样。

我们建议

哺乳动物分离白细胞后，加入适量的TRIzol试剂（2ml血液分离获得的白细胞约加入1ml的TRIzol），使用移液器反复吹打细胞，直至看不见成团的细胞块，使之充分溶解于TRIzol中形成清亮不粘稠的液体，并全部转移至标记好的进口冻存管中，将冻存管迅速投入液氮速冻，然后于液氮中存放或转入-80℃ 超低温冰箱保存；

注意：严禁使用肝素抗凝管采血，因为肝素使提取效率降低也会影响PCR效率。

微生物样本

针 对不同培养类型的微生物样本

我们建议

固体培养的微生物，利用无菌的刀片在固体培养基上刮取单一的菌种，转移至标记好的进口冻存管中，切勿刮到培养基；立即转入液氮中速冻，-80℃保存，用干冰运输。

液体培养的微生物，对数扩增期的菌体进行离心收集得菌体沉淀到离心管中后进行重悬清洗掉培养基，离心收集菌体沉淀，立即液氮速冻。 -80℃ 保存，用干冰运输。

菌类样品不建议直接保存于 TRIzol 裂解剂中送样，大部分菌类尤其是阳性菌样品未经处理直接使用 TRIzol 法提取不成功。

微分基因为您提供专业的RNA-Seq服务，欢迎老师咨询合作！

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